免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)。
取材
1. 实验前准备好手术刀、手术剪、镊子、解剖盘、组织滤纸、10%中性福尔马林固定液、70%~95%乙醇、石蜡等。
2. 取材时,用手术刀轻轻剥离取出组织,放入10%中性福尔马林固定液中固定,固定液量应为组织体积的5~10倍,组织块不宜过大,一般1.5cm×1.5cm×0.3cm。
3. 固定液的量要足够,确保组织在其中能充分固定,固定时间一般在18~24h。
固定
1. 组织取材后,要立即放入固定液中进行固定,以防止组织自溶与腐败。
2. 常用的固定液有10%的甲醛(福尔马林)、酒精、醋酸酒精等。
3. 本实验采用10%的中性福尔马林固定液,将组织块放入其中进行固定。
4. 固定液的量应为组织体积的5~10倍,固定时间一般在18~24h,以使组织充分固定。
脱水
1. 组织经过固定后需要进行脱水,以去除组织中的水分。
2. 常用的脱水剂有酒精、二甲苯等。本实验采用70%~95%的酒精进行脱水。
3. 将固定好的组织取出,放入70%~95%的酒精中进行脱水,每隔一段时间更换一次酒精,直至组织不再发白为止。
4. 脱水的时间一般在30min~2h之间,具体时间根据组织的性质和大小而定。
包埋
1. 脱水后的组织需要进行包埋,以使其能够耐受切片过程中的机械作用力。
2. 常用的包埋剂有石蜡、树脂等。本实验采用石蜡作为包埋剂。
3. 将脱水后的组织取出,放入熔化的石蜡中进行包埋。
切片
1.使用旋转式或滑动式切片机将蜡块中的组织切成非常薄的切片(通常为4-6微米)。
2.切片过程需要非常小心,以确保切得均匀且不损坏组织。
3.切片后,将切片放置在载玻片上。
脱蜡
1.将载玻片上的切片置于脱蜡剂中,以去除蜡块并使切片恢复水合状态。
2.脱蜡过程通常涉及将载玻片在不同浓度的酒精中逐渐脱蜡,然后在水中进行最后的水合。
组织包埋机
主要用于动植物标本经脱水浸蜡后进行组织蜡块包埋,以供切片后作组织学诊断或研究。本产品由主机+冷台+热台三部分组成,具有5个温控系统,其中蜡缸、蜡嘴、工作台、保存缸和储镊块温度控制在室温-99℃范围内任意可调,冷台温度可控,容积6L,一次可满足400个组织同时包埋。
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